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動物組織中提取總RNA的要領
作者:沐凡生物網  轉載自:天然植物提取物  發(fā)布日期:2018-03-15

    嘗試目標:把握由動物組織中提取總RNA的要領

 

  嘗試道理:Trizol試劑是一個包括酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液,其在裂解細胞的同時克制RNase的活性,隨后插手氯仿,酚會大量的消融在氯仿中。因為DNA和RNA在酸性酚中的消融性差異,造成DNA漫衍在基層的氯仿酚溶液中,食品檢測,RNA則漫衍在上層的水相中,最后用異丙醇沉淀水相中的RNA,并用70%乙醇洗滌沉淀,這樣就可以獲得較量純凈的總RNA.

 

  嘗試步調:

 

  ①先在研缽中插手液氮,再將組織剪成小塊在液氮中磨成粉末,飼料檢測,用液氮預冷的藥匙取50~100mg組織粉末插手已盛有1ml的Trizol液的EP管中(留意組織粉末總體積不能高出所用Trizol體積的10%),充實殽雜勻稱。

 

  ②室溫安排5min,然后插手200??l的氯仿,蓋緊EP管并強烈搖蕩15秒鐘。

 

 ?、?2000rpm離心10min,取上層水相于一新的EP管中(萬萬不要將中間的沉淀層和基層液混入,不然從頭離心疏散),插手500??l異丙醇,暖和顛倒混勻。室溫安排10min,12000rpm離心10min。

 

 ?、芫璧貤壢ド锨逡海迨?ml的75%乙醇,渦旋混勻,4℃下12000rpm離心5min。一再操縱一次。

 

 ?、輻壢ド锨逡?只管將殘余液體撤除),室溫或真空干燥5~10min(留意不要干燥過度,不然會低落RNA的消融度)。用30??l DEPC處理賞罰過的水將RNA消融,須要時可55℃~60℃水浴10min。RNA可舉辦mRNA疏散,或貯存于70%乙醇并生涯于-70℃。


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