|
嘗試目標(biāo)：把握由動物組織中提取總RNA的要領(lǐng) 嘗試道理：Trizol試劑是一個包括酚、異硫氰酸胍和SDS的單相酸性溶液，其在裂解細(xì)胞的同時克制RNase的活性，隨后插手氯仿，酚會大量的消融在氯仿中。因為DNA和RNA在酸性酚中的消融性差異，造成DNA漫衍在基層的氯仿酚溶液中，食品檢測，RNA則漫衍在上層的水相中，最后用異丙醇沉淀水相中的RNA，并用70%乙醇洗滌沉淀，這樣就可以獲得較量純凈的總RNA. 嘗試步調(diào)： ?、傧仍谘欣徶胁迨忠旱?，再將組織剪成小塊在液氮中磨成粉末，飼料檢測，用液氮預(yù)冷的藥匙取50～100mg組織粉末插手已盛有1ml的Trizol液的EP管中(留意組織粉末總體積不能高出所用Trizol體積的10%)，充實殽雜勻稱。 ②室溫安排5min，然后插手200??l的氯仿，蓋緊EP管并強(qiáng)烈搖蕩15秒鐘。 ③12000rpm離心10min，取上層水相于一新的EP管中(萬萬不要將中間的沉淀層和基層液混入，不然從頭離心疏散)，插手500??l異丙醇，暖和顛倒混勻。室溫安排10min，12000rpm離心10min。 ④警惕地棄去上清液，插手1ml的75%乙醇，渦旋混勻，4℃下12000rpm離心5min。一再操縱一次。 ?、輻壢ド锨逡?只管將殘余液體撤除)，室溫或真空干燥5～10min(留意不要干燥過度，不然會低落RNA的消融度)。用30??l DEPC處理賞罰過的水將RNA消融，須要時可55℃～60℃水浴10min。RNA可舉辦mRNA疏散，或貯存于70%乙醇并生涯于-70℃。
|
